蛋白層析柱在蛋白,多肽,抗體等等行業(yè)中占據(jù)了重要的地位,廣泛應用于制備分離的各類化合物。蛋白層析柱在原有蛋白層析分離柱的特性上還兼具了以下特性:
1、耐高壓:允許實驗過程中使用較高的流速,加快實驗進程以及適合硬基質(zhì)的色譜填料。
2、防爆性:可以選擇外貼防爆膜,防止玻璃管子爆裂,對人員造成傷害。
3、可重復:一根柱管可多次使用,大大節(jié)約了您的成本。
4、可見性:分離帶顏色復雜天然產(chǎn)物,您可以直觀的看到分離色帶。
5、篩板:可以提供各種粒徑的篩板,優(yōu)良的分配效果,達到更好的分離度。
6、優(yōu)異的流體結(jié)構。
蛋白質(zhì)層析通過利用蛋白質(zhì)在流動相和固定相中分配不同的原理進行分離和純化。 蛋白質(zhì)層析技術是生物化學研究中的一個重要工具,它根據(jù)蛋白質(zhì)的物理和化學特性實現(xiàn)高效純化。
基本原理
定義:蛋白質(zhì)層析是一種利用蛋白質(zhì)在流動相和固定相之間不同分配原理進行分離純化的技術。
原理:不同蛋白質(zhì)具有不同的物理和化學特性,如分子大小、形狀、電荷和疏水性等。當?shù)鞍踪|(zhì)溶液流經(jīng)固定相時,各組分以不同強度的作用力結(jié)合在固定相上,從而實現(xiàn)分離。
主要類型
凝膠過濾層析:利用蛋白質(zhì)分子的大小差異進行分離。大分子無法進入凝膠顆粒的孔隙,優(yōu)先洗脫;小分子則進入孔隙,延后洗脫。
離子交換層析:基于蛋白質(zhì)表面電荷的差異進行分離。通過改變pH或增加離子強度,使帶電蛋白質(zhì)與固定相的離子交換樹脂可逆結(jié)合并逐一洗脫。
親和層析:利用生物大分子的特異性親和力進行分離。例如,通過基因工程引入特定標簽,使目標蛋白與配基特異性結(jié)合,從而實現(xiàn)高效純化。
疏水作用層析:通過蛋白質(zhì)疏水性差異進行分離。在高鹽條件下蛋白質(zhì)疏水性增強,與固定相疏水配基結(jié)合,然后逐步降低鹽濃度將蛋白質(zhì)洗脫。
蛋白層析柱的工作原理
1. 預處理:在吸附樹脂的生產(chǎn)過程中,一般采用的是工業(yè)級原料,產(chǎn)品沒有經(jīng)過進一步純化處理,樹脂內(nèi)部殘留少量單體,所以在使用之前,需用水溶性溶劑對其浸泡處理,然后用去離子水通過樹脂層,置換出水溶性溶劑離子方可投入使用。
2. 逆流洗柱:用水洗出去水離子及破碎填料,樹脂裝入后,用蒸餾水反洗樹脂層,直至出水清晰、無氣味、無細碎樹脂為止。再依次用酸堿等浸泡、沖洗樹脂層,至出水呈中性為止。
3. 水洗:水洗的主要目的是除去層析柱上所附著的渣滓。
4. 吸附:吸附操作自上而下(或自下而上)通液,可采用不同流速,以選取*條件。流出液每隔一段時間取樣檢測,達泄漏點停止吸附,或多柱串聯(lián)達飽和后解吸。吸附主要是吸取料液中的渣滓或要回收物,該過程應控制料液的速度及吸附量,大孔樹脂應*浸泡在料液里,以提高吸附效果和運行穩(wěn)定性。
5. 解吸、再生:解吸操作自上而下(或自下而上)通解吸劑,單柱吸附時,解吸與吸附操作對流為佳。解吸劑沸點要低以便回收處理。
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