色譜工作者常會碰到這樣的問題,什么時候該換
Inertsil色譜柱了? 色譜柱的塔板數(shù)能體現(xiàn)色譜柱的狀態(tài)嗎?確定表明一支色譜柱應該“退休”的標準,從經(jīng)驗來看,當一支色譜柱的塔板數(shù)降低到新柱子時的百分之多少時就可以認為該色譜柱不能再使用了呢?
塔板數(shù)是一個粗略的指標,不能作為評價色譜柱的標準。通常使用塔板數(shù)來考察色譜系統(tǒng):將新柱子接到儀器上,根據(jù)色譜柱生產(chǎn)商提供的測試條件測試該色譜柱,你應該得到和分析報告上同樣的結(jié)果。
差的也應該得到比報告值低10%的塔板數(shù)。如果你所測得的塔板數(shù)遠遠低于廠家提供的報告數(shù)據(jù),這就說明你的色譜系統(tǒng)可能存在一些問題。進樣器、柱外效應、毛細連接以及檢測器都是容易出現(xiàn)問題的地方。
相信每個色譜工作者都會關(guān)心分辨率,分辨率是考察一根Inertsil色譜柱分離具體樣品的好壞程度的指標。色譜的核心任務就是為了使每個峰完成分離,我們在實際工作中需要得到合理峰寬的窄峰以便獲得較低的檢測限(這已經(jīng)不是什么難題,現(xiàn)在的色譜柱都可以達到這個要求)。
然而,我們需要考慮的另一個因素是塔板數(shù)對分辨率的影響僅僅是平方根的關(guān)系,這意味著當一根色譜柱的塔板數(shù)下降50%,分辨率僅僅下降7%。而當一根色譜柱塔板數(shù)下降為新柱子一半的時候,你肯定看到了其它更加嚴重的癥狀告訴你這根色譜柱的壽命不長了。
其實,大多數(shù)用戶僅僅使用色譜柱塔板數(shù)的一小部分。例如,對一支新的150mm×4.6mm,5mm粒徑的色譜柱來講,廠家測試報告上的塔板數(shù)為14,000。
一支150mm×4.6mm,5mm粒徑的色譜柱的柱效大約為9000,比廠家測試數(shù)據(jù)低30%。在實際的工作中,大多數(shù)色譜方法僅僅需要這些塔板數(shù)的一半,這些色譜方法還有優(yōu)化的空間嗎?答案是肯定的??梢姡V柱的塔板數(shù)不是分離中重要的參數(shù)。
較好的方法是使用壓力、分辨率和峰形的混合指標來考察一根色譜柱的狀態(tài)。壓力的測量是zui容易的,通常我們確定的色譜方法要滿足以下的要求:用新柱子時柱壓不高于2500psi,在任何情況下壓力都不超過3000psi。
盡管現(xiàn)代的液相色譜系統(tǒng)都可在更高的壓力下使用,但由于高壓產(chǎn)生的系統(tǒng)損耗和泄漏的問題會很嚴重。當壓力超過3000psi時,考慮更換進樣器和色譜柱之間的0.5mm孔徑的在線濾片。
如果更換濾片后壓力仍然高,則色譜柱的濾片或者是色譜柱已經(jīng)被污染,這提示我們該換柱子了。有統(tǒng)計表明,超過60%的色譜柱損壞是由于壓力過高的原因。