凝膠色譜柱是一種常用的分離技術(shù),廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、生物化學(xué)、藥學(xué)、食品科學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域。它的基本原理是通過凝膠顆粒來實(shí)現(xiàn)樣品分離,凝膠顆粒根據(jù)其物理化學(xué)性質(zhì)選擇性地固定不同的化合物,從而實(shí)現(xiàn)樣品的分離和純化。
常見的凝膠材料包括聚丙烯酰胺凝膠(Polyacrylamide Gel,簡稱PA)、瓊脂糖凝膠(Agarose Gel)和硅膠凝膠(Silica Gel)。聚丙烯酰胺凝膠主要應(yīng)用于蛋白質(zhì)、多肽和核酸的分析和純化,瓊脂糖凝膠主要應(yīng)用于大分子多糖、DNA片段的分析和純化,硅膠凝膠主要應(yīng)用于小分子化合物的分析和純化。
凝膠色譜柱的分離機(jī)理主要包括凝膠顆粒的吸附和分子篩效應(yīng)。凝膠顆粒表面的功能基團(tuán)能夠與化合物發(fā)生作用,形成化學(xué)鍵,使其被固定在凝膠上。當(dāng)樣品通過凝膠色譜柱時(shí),分子會根據(jù)其不同的分子大小、電荷、親疏水性等物理化學(xué)性質(zhì)在凝膠顆粒表面逗留時(shí)間不同,從而實(shí)現(xiàn)分離和純化。
常見分類:
凝膠色譜柱有不同的形態(tài),包括管柱、板柱和石英管柱等。
管柱是一種常用的凝膠色譜柱,通常是由玻璃或塑料制成的管,內(nèi)部填充著凝膠。
板柱通常由平板材料制成,是一種較新的型號。
石英管柱則是由石英材料制成的,因其化學(xué)和物理性質(zhì)穩(wěn)定,被廣泛應(yīng)用于高效液相色譜中。凝膠色譜柱還有不同的填充方式,包括前充式、后充式和包覆式等,不同的填充方式適用于不同的樣品和分析條件。
產(chǎn)品應(yīng)用:
凝膠色譜柱的應(yīng)用非常廣泛。在蛋白質(zhì)分離和純化中,凝膠色譜柱通常作為一種重要的步驟。例如,離子交換柱、尺寸排除柱、親和層析柱和疏水柱等可以在不同的層次上對蛋白質(zhì)進(jìn)行分離和純化。
在核酸分析中,瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的技術(shù),可用于分離不同長度的DNA片段。在藥學(xué)中,凝膠色譜柱也被廣泛應(yīng)用于藥物分析和檢測,包括毒物檢測、藥物代謝動力學(xué)和藥典標(biāo)準(zhǔn)化等。
產(chǎn)品特點(diǎn):
(1)Supdex:高分辨率凝膠過濾層析,精細(xì)純化
Supdex30pg、Supdex75pg、Supdex 200 pg為新一代凝膠過濾介質(zhì),由葡聚糖與高交聯(lián)度瓊脂糖共價(jià) 結(jié)合而成,高交聯(lián)度瓊脂糖賦予了介質(zhì)較高的耐壓性,介質(zhì)中分布的葡聚糖實(shí)現(xiàn)了其對不同大小蛋白和多肽的高度分離,能夠?qū)崿F(xiàn)高流速下高分辨率的精細(xì)分離純化實(shí)驗(yàn)。
(2)Pharose Fast Flow:大分子凝膠過濾
Pharose系列生物分子純化介質(zhì)是基于高交聯(lián)瓊脂糖微球開發(fā)的傳統(tǒng)生物分離介質(zhì),該產(chǎn)品保留了天然多糖 化合物**的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu),與生物活性大分子有很好的相容性,具有高載量,高適用性,無非特異性吸 附,快流速操作等特點(diǎn),廣泛用于病毒、蛋白質(zhì)、核酸、多肽及多糖等的生物大分子實(shí)驗(yàn)室規(guī)模制備和生物制 藥、生物工程的大工業(yè)化制備。
(3)Bedex:經(jīng)濟(jì)快速脫鹽/置換溶液
Bedex系列是基于交聯(lián)葡聚糖微球開發(fā)的凝膠過濾介質(zhì),該產(chǎn)品具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性和較高的分辨率,具 有多種分離范圍和顆粒大小可供選擇,廣泛用于蛋白質(zhì)的分離和蛋白質(zhì)的脫鹽/置換溶液。
使用和維護(hù):
凝膠色譜柱的使用和維護(hù)也十分重要,以下是幾點(diǎn)使用凝膠色譜柱的建議:
1. 在使用之前,首先應(yīng)當(dāng)充分平衡凝膠顆粒,即將緩沖液流經(jīng)凝膠時(shí),緩沖液的pH值和離子強(qiáng)度可以隨時(shí)間穩(wěn)定下來。
2. 樣品中出現(xiàn)沉淀物時(shí),應(yīng)當(dāng)采用化學(xué)清洗方法,而不是物理清洗方法,以避免柱體受損。
3. 在保養(yǎng)凝膠色譜柱時(shí),應(yīng)當(dāng)保證柱體充分干燥,并存儲在合適的溫度和濕度條件下,以保證其長期可靠使用。
凝膠色譜柱是一種構(gòu)建于化學(xué)、物理和生物學(xué)基礎(chǔ)之上的高效分離和純化技術(shù)。隨著分析和純化技術(shù)的不斷發(fā)展和完善,它在科學(xué)研究和產(chǎn)業(yè)應(yīng)用中的地位和作用也將不斷得到提高。
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